◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.xlogit.com)◇◇   也谈小鼠采血量及生化指标检测的问题   吴老六   司教授提出魏院士PNAS论文关于小鼠采血的疑点之后,先后有shameman, ultra天行健及Sheepman等网友作过说明和评论。本人从事实验动物相关工作, 又做过3个月小鼠的血生化检测,所以想谈谈自己的观点。为了不搞错问题,多 点实事求是的基础,我找来魏的原文(PNAS September 25, 2001 vol. 98 no. 20 : 11545–11550)拜读一番。原文是这样的:In addition, hepatotoxicity was assessed once monthly for 14 months by the measurement of plasma alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, and direct bilirubin. At the same time, renal damage was assessed by measuring plasma urea nitrogen and creatinine. No abnormal changes were indicated by these biochemical analyses (data not shown)。魏一共检测5个生化指标,并在文中明确说明10 mice in each group。以上是事情的根源。就此出现两个关键问题。   第一问题是采血途径及采血量(本文指能够连续成功且保证小鼠存活)。天 行健先生提出了通过断尾采血作血生化分析的方法。小鼠断尾采血取20uL是可以 的,一般只能做血常规及细胞分类。要说这点血量测生化指标,不会是天方夜谭 吧?一月龄以上小鼠经眶静脉丛采血可以达500,小鼠可保不死,但技术要求特 别熟练,不是每个人能够做到。本人大概采过2000鼠次,平均采血量只能达350 -400uL,致小鼠死亡约5%。我的方法是用TIP头经加温拉伸后剪成斜口,直接 刺眶静脉丛采血。凭本人主观感觉,100只小鼠连续采血10次(假设每月一次), 估计存活75只就很不错了。另外,摘眼球也是常用方法,可采血700-800uL,但是 只能使用两次。   第二个问题是仪器对样本量的要求。我所用的生化分析仪有最小样本量的要 求,最少80uL以上,每测一个指标需耗20uL左右。本人使用仪器是日产7170全自 动生化分析仪。我以为Sheepman所言不虚,魏院士检测5个指标还是有依据的。 只是建议天行健把您知道的先进机器告诉大家(无最小标本量的要求,且可以完 成单指标只需2微升血样级别的检测),解决大家以后可能会遇到的问题。如果能 够这样,我想魏先生应该会检测更多指标的。   本人正是由于需要连续采血测血生化指标,所以没有作出什么名堂,更没有 能发表理想的实验结果。所以,我认为魏的论文确实有一些问题该交代清楚:您 究竟采用了什么采血途径及检测方法?如果和本人实验方法类似,这些小鼠全部 存活14周了吗?多少小鼠未能成功采血?如果每个月采血这么多,是否对小鼠肝 肾功能都无影响呢?   综上所述,我的经验和Sheepman一致的是,对小鼠非处死采血检验肝肾功能 是可能的,但是我确信,像如魏院士课题组一样,长期(1次/月,连续14月)且 同时检验肝肾功能(包括荷瘤鼠?)是非常非常非常困难的。 (XYS20060420) ◇◇新语丝(www.xys.org)(xys.dxiong.com)(xys.3322.org)(xys.xlogit.com)◇◇